操作步骤 (仅供参考) ： 1、还原糖的提取： ①称取植物样品 0.5~3g，剪碎，加入蒸馏水约 3 ml 匀浆，转移至烧杯或三角瓶中，用 12 ml 蒸馏水冲洗研磨器 2~3 次，洗出液也转移至该容器。 ②50℃水浴 30 min，并不时搅拌，以便还原糖彻底浸出。 ③将沉淀和浸出液转移至 50 ml 离心管，4000g 离心 5 min。 ④留取上清液，向沉淀中加入 20 ml 蒸馏水，混匀，再次 4000g 离心 5 min。 ⑤留取上清液，将 2 次获得的上清液合并，用蒸馏水定容至 100 ml(提取液)，混匀，作为还 原糖待测液。 2、总糖的水解和提取： ①称取植物样品 0.5~3g，剪碎，加入蒸馏水约 3 ml 匀浆，转移至烧杯或三角瓶中，用 12 ml 蒸馏水冲洗研磨器 2~3 次，洗出液也转移至该容器。 ②向容器中加入 10 ml 6 M 盐酸溶液，搅拌均匀，煮沸 30 min，并不时搅拌。 ③取 2 滴滴加于载玻片上，滴加 1 滴显色液，检查水解是否完全，如已经水解完全则不显示蓝色。 ④水解完毕后，冷却至室温，加入 6 M 氢氧化钠溶液，使溶液 pH 至 7.4 左右，用蒸馏水定 容至 100 ml，混匀，4000g 离心 5 min 或过滤，获得上清或滤液。 ⑤取上清或滤液 10 ml，用蒸馏水定容至 100 ml，成稀释 10 倍的总糖水解液(提取液)，取1 ml 总糖水解液，测定其还原糖的含量。 3、制作葡萄糖标准曲线：取干净离心管或试管，按下表进行操作，以 0 号调零，检测 540n m 处吸光度，以吸光度为纵坐标，各标准浓度(mg/ ml)为横坐标作图得标准曲线。
加入物质(ml)
0 1 2 3 4 5
Glu 标准(1 mg/ ml)
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水
1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
D NS 试剂
2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
沸水浴中准确煮沸 5 min，取出，自来水冷却至室温。
蒸馏水
9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0
相当于葡萄糖量
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
4、还原糖测定：取制备好的还原糖提取液或者总糖水解液 1 ml，分别加入 DNS 试剂 2 ml， 其余操作同标准曲线的操作，540n m 处测定各管的吸光度。 计算： 还原糖的百分含量： 还原糖含量(%)=(C×V T )/(m×Vs)×100 总糖的百分含量： 总糖含量(%)=(C×V T )/(m×Vs)×100×10×0.9 式中：C=从标准曲线查的糖量(mg) V T =提取液的体积(ml) m =植物样品的质量(mg) V s =测定时用的样品体积(ml)
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