钙盐染色液( (n Von a Kossa 银法) ) 产品简介: 钙在人体内大量存在,构成骨骼作为支持人体的支架,在分泌、运送、肌肉收缩、神经传导等也起重要作用,钙在机体内以两种形式存在,一种是离子钙,存在血液循环内,即所谓血钙;另一种是结合钙,和蛋白、碳酸或磷酸结合而沉着在组织内,除骨骼和牙齿外正常时钙渗透在所有组织和细胞中,一般不以固体状态出现在组织内,但在某些情况下钙析出成固体并沉着于组织内,则为病理性钙盐沉着,沉着的钙盐主要是磷酸钙,其次为碳酸钙。钙盐通常是单折射的,但草酸钙是双折射的,当使用 HE 染色时钙一般呈紫蓝色,许多染料可以于钙形成螯合物,包括茜素红 S、红紫素、核固红等,茜素红 S 属一种蒽醌类衍生物,是茜素磺酸钠盐,它能与碳酸钙或磷酸钙中的钙盐螯合形成橙红色复合物。 钙盐染色常用方法有硝酸银法和茜素红 S 法,钙盐染色液(Von Kossa 银法)又称冯库萨染色液,属金属置换法,其原理在于 Von Kossa 银溶液作用于含有不溶性钙盐的切片时,钙被银置换,银盐在光的作用下被还原为黑色金属银,适用于大量样本的钙盐组织染色。该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。 产品组成:
名称/编号 |
2×50ml |
Storage |
试剂(A): Von Kossa 银溶液 |
50ml |
4℃ 避光 |
试剂(B): 海波溶液 |
50ml |
RT |
试剂(C): Von Kossa 对照液 |
10ml |
4℃ |
使用说明书 |
1 份 |
自备材料: 1、10%中性福尔马林固定液 2、系列乙醇 3、蒸馏水 操作步骤 (仅供参考) : 一、常规染色 1、组织固定于 10%中性福尔马林固定液,常规脱水包埋。 2、切片厚度 3~5μm,常规二甲苯或 Leagene 脱蜡透明液脱蜡至水,蒸馏水洗。 3、切片入 Von Kossa 银溶液,强光照射 15~60min(见注意事项 2),蒸馏水洗 1min。 4、入海波溶液处理 2min,HE 染色液或 Van Gieson 复染细胞核 1min。 5、常规脱水,二甲苯或 Leagene 脱蜡透明液 透明,中性树胶封固。 二、不溶性钙染色 1、组织固定于 10%中性福尔马林固定液,常规脱水,注意在 95%乙醇中脱水应充分。 2、塑料包埋,室温过夜,37℃烤箱中聚合 2~4 天,-20℃冰箱冷却 15~20min。 3、切片厚度 3~5μm,未脱钙骨切片脱塑至水,蒸馏水洗。 4、切片入 Von Kossa 银溶液,强光照射 10~60min(见注意事项 2),蒸馏水洗。 5、入海波溶液处理 2min,HE 染色液、中性红或 Van Gieson 复染细胞核 1min。 6、常规脱水,二甲苯或 Leagene 脱蜡透明液透明,中性树胶封固。 染色结果:
钙盐 |
黑褐色至深黑色 |
细胞核 |
根据复染液不同而不同 |
阴性对照 : 如有必要,可做阴性对照。取另外一张连续切片脱蜡(脱塑)至水,置于 Von Kossa对照液处理 10~20min,蒸馏水冲洗,与试验片一同入 Von Kossa 银溶液,余下步骤同上,结果为阴性。 注意事项: 1、 钙盐组织固定以中性福尔马林为佳,不宜采用 Bouin 液等酸性固定液和甲醛钙固定液;如用常规的 10%福尔马林固定,固定 4~6h 后即可进行脱水包埋,以防止固定液酸化导致钙盐溶解。 2、 作用时间取决于阳光照射时光的强度和时间;如暴露于强光下 15min 已经足够;如暴露于紫外灯下 10min 即可;如暴露于一般光线下,宜适当延长曝光时间。 3、 如果钙盐染色过深,可用蒸馏水适当稀释 Von Kossa 银溶液或减少光照时间或光照强度;如果钙盐染色较浅,应增加 Von Kossa 银溶液用量并增加光照时间和光照强度。 4、 该染色法可以区分尿酸盐和钙盐,其原理在于钙盐不溶解于碳酸锂溶液,尿酸盐易溶解于碳酸锂溶液,切片经碳酸锂处理后入 Von Kossa 银溶液并置于强光下尿酸盐呈阴性反应。 有效期: 12 个月有效;4℃运输,4℃保存
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