苏木素伊红染色液(HE染色液) 说明书

产品简介:
       苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛。苏木精是从原产中南美的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶，是一种碱性染色剂，它在被氧化后生成苏木素，同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用，能够使细胞核染色。在病理诊断、教学和科研工作中，常用HE染色对正常组织和病变组织进行形态结构观察，可确定或鉴别病变组织、细胞中出现的某些异常物质与特殊成分，而需要采用的特殊染色方法、酶组织化学方法、免疫组织化学方法等也均是在观察 HE染色组织切片的基础上进行的，在HE染色的组织切片中细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察
分析。
        苏木素伊红染色液中，苏木素染色液采用自主研发的配方，由进口的高纯度苏木精、氧化剂等组成，不含氧化汞、甲醇等有害物质，对细胞核染色效果好，其特点是不易产生沉淀和金属;应用范围广，可以用于人、动物、畜牧、水产等领域，可以用于组织石蜡切片、冰冻切片和组织细胞的染色等;苏木素染色液可以重复使用。

染色原理:
1.细胞核染色原理:
苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色，细胞核内染色质的成分主要是DNA在DNA双螺旋结构中两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
2.细胞浆染色原理:
伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色，细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH值密切相关，当染色液pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7~5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。
3.分化作用:
染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中常用05-1%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色。大多数组织经苏木素染色后，必须用盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去，再进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的
分明。
4.返蓝作用：
分化之后，苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色;在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色，立即用水除去组织切片上的酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用，另外用自来水(尤其是温水)浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。

产品组成:

组成                                       2×100ml             2×500ml

试剂(A):苏木素染色液               100ml                  500ml                 RT
试剂(B):伊红染色液(醇溶)          100ml                  500ml                 RT
使用说明书                              1 份                     1 份

自备材料:
1、盐酸乙醇分化液
2、蓝化液，如稀氨水、碳酸锂溶液等
3、系列乙醇
4、4%多聚甲醛

操作步骤(仅供参考):
(一)石蜡切片染色
1、切片脱蜡至水
①二甲苯或浸蜡脱蜡透明液作用2次，每次5~10min.
②(可选)无水乙醇作用2次，每次3~5min.
③95%乙醇 3~5min
④90%乙醇 3~5min
⑤80%乙醇 3~5min
⑥自来水或蒸馏水(亦可用30~40℃温水)冲洗 1~3min
2、染色
①苏木素染色液染色 5~8min
②自来水或蒸馏水冲洗 5~10s
③(可选)盐酸乙醇分化 2~5s
④自来水冲洗 20~30s
⑤蓝化液或温水返蓝 20~40s
⑥80%乙醇脱水 30~60s
⑦伊红染色液染色 3~5min
3、脱水、透明、封固
①80%乙醇 10~20s
②90%乙醇 10~20s
③95%乙醇作用2次，每次1~2min
④无水乙醇作用2次每次2~3min
⑤二甲苯或浸蜡脱蜡透明液透明3次，每次2~3min.
⑥中性树脂封片。
染色结果:细胞核呈蓝色;细胞质、肌纤维、胶原纤维、甲状腺胶质等呈深浅不一的红色;角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。
(二)冰冻切片染色
1、乙醚-乙醇混合固定液 5~10s
2、自来水冲洗 2~5s
3、苏木素染色液滴染1~2min(可加热至 50°℃)
4、自来水冲洗 2~5s
5、(可选)盐酸乙醇分化 2~5s
6、自来水冲洗 2~5s
7、蓝化液或温水返蓝 2~5s
8、80%乙醇脱水 5~10s
9、伊红染色液染色 2~5s
10、80%乙醇 1~2s
11、95%乙醇 1~25
12、无水乙醇 2~5s
13、苯酚二甲苯(1:3) 2~5s
14、二甲苯或浸蜡脱蜡透明液透明3次，每次2~5s。
15、中性树脂封片。
备选方案：
1.无需脱蜡，直接迅速用蒸馏水冲洗2~3min.
2.染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。
染色结果:细胞核呈蓝色;细胞质、纤维呈红色。
(三)细胞染色
1、4%多聚甲醛固定10~20min。
2、自来水冲洗2次，每次2min.
3、蒸馏水冲洗2次，每次2min
4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤，作用时间应相应缩短。
染色结果:细胞核呈蓝色;细胞质、纤维呈红色。

注意事项:
1、切片脱蜡应尽量干净;系列乙醇应经常更换新液
2、盐酸乙醇分化时间应根据切片厚薄、组织类别以及新旧而定，另外分化后自来水冲洗时间应该足够，以便彻底清洗酸。
3、乙醚-乙醇混合固定液是由乙醚和95%乙醇等量混合而得，再加入适量乙酸，密闭
保存。
4、冷冻切片染色时间尽量要短。
5、蓝化液常使用0.2~1%氨水或Scott促蓝液或0.1~1%碳酸锂溶液。
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。