一、酵母培养基种类及用途
一缺培养基
用于单质粒酵母转化筛选，外源基因在酵母中的表达、异源基因功能互补、酵母单杂交 和酵母双杂交初始质粒转化。
二缺培养基
用于双质粒酵母转化筛选，外源基因在酵母中的表达、异源基因功能互补、酵母单杂交 和酵母双杂交初始质粒转化免疫共沉淀，Y187、AH109/Y2HGold、NMY51 酵母杂交实验，接合型二倍体筛选。
三缺培养基
用于双质粒酵母转化筛选和报告基因检测，外源基因在酵母中的表达、异源基因功能互 补、酵母单杂交和双杂交报告基因检测，Y187、AH109/Y2HGold、NMY51 酵母交配实验后报告基因分析（His3，Ade2)。
四缺培养基
用于报告基因分析，酵母双杂交和酵母三杂交报告基因检测，Y187、AH109/Y2HGold、NMY51 酵母交配实验后报告基因分析（His3，Ade2)。
五缺培养基
用于报告基因分析和表型分析，酵母三杂交报告基因检测(His3，Ade2)、酵母营养缺陷型分离鉴定和表型分析。
六缺培养基
用于报告基因分析、表型分析和药物毒理分析，酵母三杂交报告基因检测、酵母营养缺 陷型分离鉴定和表型分析、药物毒理分析。
Rich medium
Rich medium 包括 YPD、YPDA、YPD Plus 系列培养基，也可以称为完全培养基。YPD Medium 由精选的蛋白胨、酵母提取物和葡萄糖按适当比例混合组成；YPDA 培养基是在 YPD 培养基中添加了适量的硫酸腺嘌呤；YPD Plus 相比于 YPDA 的营养更为丰富，可直接用于酿酒酵母感受态的复苏，可以提高转化效率。YPD Agar、YPDA Agar 分别在YPD、YPDA 基础上加入了 Agar，作为固体培养基倒板用。YPD 系列培养基用于酿酒酵母的常规培养。
二、酵母培养基的配制
（1） Rich Liquid Media (Broth)
1. 取 50g 的 YPD/YPDA 加 1L 的去离子水中溶解；
2. 调节 pH 至 6.5，121℃高压灭菌 15min；
3. 避光、室温条件下储存灭菌培养基。
（2） Rich Plating Media with Agar
1. 取 70g 的 YPD Agar/YPDA Agar 加 1L 的去离子水中溶解（琼脂在高温灭菌后溶解）；
2. 调节 pH 至 6.5，121℃高压灭菌 15min；
3. 冷却到 50℃把培养基倒入平板中，室温使其凝固，封口膜封好后倒置保存在 4℃冰箱。
（3） Minimal SD Base
1. 在 1L 去离子水中加入 26.7g 的 Minimal SD Base，然后再加入相应量的缺陷氨基酸，搅拌溶解；
2. 调节 pH 至 5.8，121℃高压灭菌 15min；
3. 避光、室温条件下储存灭菌培养基。
（4） Minimal SD Agar Base
1. 在 1L 去离子水中加入 46.7g 的 Minimal SD Base，然后再加入相应量的缺陷氨基酸，搅拌溶解；
2. 调节 pH 至 5.8，121℃高压灭菌 15min；
3. 冷却到 50℃把培养基倒入平板中，室温使其凝固，封口膜封好后倒置保存在 4℃冰箱。
（5） DO（缺陷氨基酸）类培养基的配制
1. 在 1L 去离子水中加入相应量的 DO 培养基，然后再加入 26.7g Minimal SD Base，搅拌溶解；
2. 调节 pH 至 5.8，121℃高压灭菌 15min；
3. 4℃冰箱避光储存已经灭菌的液体培养基。
或：1. 在 900ml 去离子水中加入相应量的 DO 培养基，然后再加入 6.7g YNB，搅拌溶解；
2. 调节 pH 至 5.8，121℃高压灭菌 15min；
3. 4℃冰箱避光储存已经灭菌的液体培养基；
4. 使用时再加入 100ml 已灭菌的 20%葡萄糖。
（6） SC（缺陷氨基酸+YNB）类培养基的配制
1. 在 1L 去离子水中加入相应量的 SC 培养基，然后再加入 20g 葡萄糖，搅拌溶解；
2. 调节 pH 至 5.8，121℃高压灭菌 15min；
3. 4℃冰箱避光储存已经灭菌的液体培养基；
或：1. 在 900ml 去离子水中加入相应量的 SC 培养基，搅拌溶解；
2. 调节 pH 至 5.8，121℃高压灭菌 15min；
3. 4℃冰箱避光储存已经灭菌的液体培养基；
4. 使用时再加入 100ml 已灭菌的 20%葡萄糖。
（7） SD（缺陷氨基酸+YNB+葡萄糖）类培养基的配制
1. 在 1L 去离子水中加入相应量的 SD 培养基，搅拌溶解；
2. 调节 pH 至 5.8，121℃高压灭菌 15min；
3. 4℃冰箱避光储存已经灭菌的液体培养基。
（8） SD with Agar（缺陷氨基酸+YNB+葡糖糖+Agar）类培养基的配制
1. 在 1L 去离子水中加入相应量 SD with Agar 培养基，搅拌溶解（琼脂在高温灭菌后溶解）；
2. 调节 pH 至 5.8，121℃高压灭菌 15min；
3. 冷却到 50℃把培养基倒入平板中，室温使其凝固，封口膜封好后倒置保存在 4℃冰箱。
注意事项：
1. 在配制酵母缺陷培养基时，培养基会变色，由浅黄到深褐色不等，对酵母的生长不会产生严重影响。
2. DO 类和 SC 类培养基均不含葡萄糖。葡萄糖高温灭菌会有碳化现象，控制好灭菌温度和时间，葡萄糖的微量碳化对实验并无太大影响。如有特殊要求可将 20%葡萄糖单独灭菌，待使用时再加入。
3. 缺陷培养基的 PH 值在 5.5-6.5 范围内都是比较适合酵母生长的，此类试剂粉末的 PH 已经过调试，使用时只需要稍微调整即可。 |
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