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黄嘌呤氧化酶（XOD）试剂盒(微量法)

货号： TOPEK190865

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TOPEK190865	100T/96S	¥560.00

中文名称	黄嘌呤氧化酶（XOD）试剂盒(微量法)
产品介绍：	黄嘌呤氧化酶（XOD）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。货号：TOPEK190865 规格：100T/96S 产品内容：提取液：液体110mL×1 瓶，4℃保存；试剂一：液体20mL×1 瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。溶液的配制：试剂二：粉剂置于试剂瓶内 EP 管中；工作液的配制：用时在试剂二中加入 9.375 mL 试剂一充分溶解，用不完的试剂 4℃可保存 2 周；按需用蒸馏水稀释 10 倍后备用，现用现配。产品说明： XOD（EC 1.17.3.2）催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子，是活性氧主要来源之一；同时也是核苷酸代谢的关键酶之一。XOD主要分布于哺乳动物的心、肺、肝脏等组织中，当肝功能受损时，XOD大量释放到血清中，对肝损害的诊断具有特异性的意义。 XOD催化黄嘌呤产生尿酸，尿酸在290nm下有特征吸收峰。注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、匀浆器/研钵、冰和蒸馏水。操作步骤：样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）细菌、细胞或组织样本的制备：细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20% 或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。或者直接用 0.5mg/mL 的酶液直接测定，为保证实验准确性建议用提取液梯度稀释后测定。血清（浆）样本：直接检测。测定步骤分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至290nm，蒸馏水调零。 2、测定前按需取出一定量的XOD检测工作液在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴30min以上。 3、空白管：在EP管中加入10μL水和250μL工作液，立即混匀并取200µL转移至微量石英比色皿或96孔板中，记录 290nm下初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。计算ΔA空白=A2-A1。 4、测定管：在EP管中加入10μL样本和250μL工作液，立即混匀并取200µL转移至微量石英比色皿或96孔板中，记录290nm下初始吸光值A3和1min后的吸光值A4。计算ΔA测定=A4-A3。三、XOD 活性计算 a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1、血清（浆）XOD计算：单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化产生1µmol尿酸定义为一个酶活力单位。 XOD（U/mL）=[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×10⁶ ]÷V样÷T=2.131×ΔA 组织、细菌或细胞中XOD计算：按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1µmol尿酸定义为一个酶活力单位。 XOD（U/mg prot）=[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×10⁶ ]÷（Cpr×V样）÷T =2.131×ΔA÷Cpr 按样本质量计算：单位的定义：每g组织每分钟催化产生1µmol尿酸定义为一个酶活力单位。 XOD（U/g 质量）=[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×10⁶]÷（V样÷V样总×W）÷T=2.131×ΔA÷W 按细菌或细胞数量计算：单位的定义：每万个细胞每分钟催化产生1µmol尿酸定义为一个酶活力单位。 XOD（U/10⁴ cell）=[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×10⁶ ]÷（V样÷V样总×500）÷T=4.262×10^-3×ΔA V反总：反应体系总体积，2.6×10^-4L；ε：尿酸摩尔消光系数，1.22×10⁴L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总数，500万；10⁶：单位换算系数，1mol=10⁶µmol。 b.用96孔板测定的计算公式如下将上述公式中的 d-1cm 修改为 d-0.6cm（96 孔板光径）进行计算即可。注意事项： 1、当 ΔA 测定大于 0.4 或者 A3 大于 1.5 时建议用提取液稀释样本后进行测定。实验实例： 1、取 0.1g 大鼠肝脏加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上，之后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算 ΔA 空白=A2-A1=0.3419-0.3351=0.007，ΔA 测定=A4-A3=0.9970-0.9747= 0.0223，按样本质量计算酶活得：XOD（U/g 质量）=2.131×ΔA÷W=0.326 U/g 质量。参考文献： [1] Zhao X, Zhu J X, Mo S F, et al. Effects of cassia oil on serum and hepatic uric acid levels in oxonate-induced mice and xanthine dehydrogenase and xanthine oxidase activities in mouse liver[J]. Journal of ethnopharmacology, 2006, 103(3): 357-365.

中文名称

黄嘌呤氧化酶（XOD）试剂盒(微量法)

产品介绍：

黄嘌呤氧化酶（XOD）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号：TOPEK190865
规格：100T/96S
产品内容：
提取液：液体110mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。
溶液的配制：

试剂二：粉剂置于试剂瓶内 EP 管中；
工作液的配制：用时在试剂二中加入 9.375 mL 试剂一充分溶解，用不完的试剂 4℃可保存 2 周；按需用蒸馏水稀释 10 倍后备用，现用现配。

产品说明：
XOD（EC 1.17.3.2）催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子，是活性氧主要来源之一；同时也是核苷酸代谢的关键酶之一。XOD主要分布于哺乳动物的心、肺、肝脏等组织中，当肝功能受损时，XOD大量释放到血清中，对肝损害的诊断具有特异性的意义。
XOD催化黄嘌呤产生尿酸，尿酸在290nm下有特征吸收峰。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、匀浆器/研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：

样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

细菌、细胞或组织样本的制备：

细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20% 或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。或者直接用 0.5mg/mL 的酶液直接测定，为保证实验准确性建议用提取液梯度稀释后测定。

血清（浆）样本：直接检测。

测定步骤

分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至290nm，蒸馏水调零。

2、测定前按需取出一定量的XOD检测工作液在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴30min以上。
3、空白管：在EP管中加入10μL水和250μL工作液，立即混匀并取200µL转移至微量石英比色皿或96孔板中，记录 290nm下初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。计算ΔA空白=A2-A1。 4、测定管：在EP管中加入10μL样本和250μL工作液，立即混匀并取200µL转移至微量石英比色皿或96孔板中，记录290nm下初始吸光值A3和1min后的吸光值A4。计算ΔA测定=A4-A3。
三、XOD 活性计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）XOD计算：
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化产生1µmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（U/mL）=[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×10⁶ ]÷V样÷T=2.131×ΔA

组织、细菌或细胞中XOD计算：

按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1µmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（U/mg prot）=[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×10⁶ ]÷（Cpr×V样）÷T =2.131×ΔA÷Cpr

按样本质量计算：

单位的定义：每g组织每分钟催化产生1µmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（U/g 质量）=[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×10⁶]÷（V样÷V样总×W）÷T=2.131×ΔA÷W

按细菌或细胞数量计算：

单位的定义：每万个细胞每分钟催化产生1µmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（U/10⁴ cell）=[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×10⁶ ]÷（V样÷V样总×500）÷T=4.262×10^-3×ΔA
V反总：反应体系总体积，2.6×10^-4L；ε：尿酸摩尔消光系数，1.22×10⁴L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总数，500万；10⁶：单位换算系数，1mol=10⁶µmol。
b.用96孔板测定的计算公式如下
将上述公式中的 d-1cm 修改为 d-0.6cm（96 孔板光径）进行计算即可。
注意事项： 1、当 ΔA 测定大于 0.4 或者 A3 大于 1.5 时建议用提取液稀释样本后进行测定。
实验实例：
1、取 0.1g 大鼠肝脏加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上，之后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算 ΔA 空白=A2-A1=0.3419-0.3351=0.007，ΔA 测定=A4-A3=0.9970-0.9747= 0.0223，按样本质量计算酶活得：XOD（U/g 质量）=2.131×ΔA÷W=0.326 U/g 质量。

参考文献： [1] Zhao X, Zhu J X, Mo S F, et al. Effects of cassia oil on serum and hepatic uric acid levels in oxonate-induced mice and xanthine dehydrogenase and xanthine oxidase activities in mouse liver[J]. Journal of ethnopharmacology, 2006, 103(3): 357-365.

注意：

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

备注:
以上数据均来自公开文献,博奥拓达暂未进行独立验证,仅供参考。
These protocols are for reference only. Biotopped does not independently validate these methods.

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