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谷胱甘肽还原酶（GR）检测试剂盒（分光光度法)

货号： TOPEK190535

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TOPEK190535	50T/48S	¥350.00

中文名称	谷胱甘肽还原酶（GR）检测试剂盒（分光光度法)
产品介绍：	谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase, GR）活性测定试剂盒说明书分光光度法货号：TOPEK190535 规格：50 管/48 样产品内容：试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 5.0 mL 蒸馏水，混匀。试剂三：液体 2.5mL×1 支，4℃保存。产品说明： GR 是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一(通常昆虫中 GR 被 TrxR 取代)。GR 催化 NADPH 还原 GSSG 生成 GSH，有助于维持体内 GSH/GSSG 比值。GR 在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外 GR 还参与抗坏血酸-谷胱甘肽循环途径。 GR 能催化NADPH 还原GSSG 再生GSH，同时不断消耗NADPH 生成NADP+；NADPH 在340nm有特征吸收峰，相反 NADP+在该波长无吸收峰；通过测定 340nm 吸光度下降速率；来测定 NADPH 脱氢速率，从而计算 GR 活性。自备仪器和用品：紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、移液器、 1mL 石英比色皿和蒸馏水。操作步骤：一、粗酶液提取组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（ml）1：5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（ml）为 500-1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml 试剂一），冰浴超声超声破碎细胞（功率 300w，超声 3s，间隔 7s，总时间 3min）；然后 10000rpm，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。二、GR 测定操作：分光光计预热 30 min 以上，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。试剂一置于 25℃(普通物质)或者 37℃(哺乳动物)中预热 30min 以上。空白管：取 1mL 石英比色皿，加入 850µL 试剂一，100µL 试剂二，50µL 试剂三，充分混匀，于 340nm 处测定 10 s 和 190 s 吸光度，记为 A 空 1 和 A 空 2，△A 空白管= A 空 1﹣A 空 2。测定管：取 1mL 石英比色皿，加入 750µL 试剂一，100µL 试剂二， 100µL 上清液，50µL 试剂三，充分混匀，于 340nm 处测定 10 s 和 190 s 吸光度，记为 A 测 1 和 A 测 2，△A 测定管= A 测 1﹣A 测 2。注意：空白管只需要测定一次。三、GR 活性计算：按蛋白浓度计算活性单位定义：在一定温度中， pH8.0 条件下，每毫克蛋白每分钟催化 1µmol NADPH 氧化。 GR 酶活(U/mg prot)= [ (△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106] ÷(Cpr×V 样)÷T =0.536×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr 按样本质量计算活性单位定义：在一定温度中， pH8.0 条件下，每克样本每分钟催化 1µmol NADPH 氧化。 GR 酶活(U/g)= [ (△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106] ÷(W×V 样÷V 样总)÷T =0.536×(△A 测定管-△A 空白管)÷W 按细胞数量计算活性单位定义：在一定温度中，pH8.0 条件下，每 104 个细胞每分钟催化 1µmol NADPH 氧化。 GR 酶活(U/104 cell)= [ (△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106] ÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T=0.536×(△A 测定管-△A 空白管)÷细胞数量 ε：NADPH 摩尔消光系数 6.22×103L/mol/cm；V 反总：反应体系总体，1000µL=0.001 L；106： 1 mol=1×106µmol；Cpr：上清液蛋白浓度（ mg/mL）；V 样：加入反应体系中上清液体积，100µL =0.1 mL；V 样总：加入提取液体积ˈ 1mL；W，样本质量，g；T：反应时间，3 min。注意事项：样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，匀浆液避免反复冻融；试剂二须现配现用，配置完后，置于冰上；测定前须先用 1～2 个样做预实验，确保 180s 内吸光值变化呈线性，哺乳动物组织一般须用试剂一稀释 2～5 倍；细胞中 GR 活性测定时，细胞数目须在 300 万-500 万之间，细胞中 GR 的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞。

中文名称

谷胱甘肽还原酶（GR）检测试剂盒（分光光度法)

产品介绍：

谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase, GR）活性测定试剂盒说明书
分光光度法
货号：TOPEK190535
规格：50 管/48 样

产品内容：

试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 5.0 mL 蒸馏水，混匀。
试剂三：液体 2.5mL×1 支，4℃保存。

产品说明：

GR 是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一(通常昆虫中 GR 被 TrxR 取代)。GR 催化 NADPH 还原 GSSG 生成 GSH，有助于维持体内 GSH/GSSG 比值。GR 在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外 GR 还参与抗坏血酸-谷胱甘肽循环途径。
GR 能催化NADPH 还原GSSG 再生GSH，同时不断消耗NADPH 生成NADP+；NADPH 在340nm有特征吸收峰，相反 NADP+在该波长无吸收峰；通过测定 340nm 吸光度下降速率；来测定 NADPH 脱氢速率，从而计算 GR 活性。

自备仪器和用品：

紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、移液器、 1mL 石英比色皿和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取

组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（ml）1：5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml

试剂一进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（ml）为 500-1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml 试剂一），冰浴超声超声破碎细胞（功率 300w，超声 3s，间隔 7s，总时间 3min）；然后 10000rpm，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

二、GR 测定操作：

分光光计预热 30 min 以上，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。
试剂一置于 25℃(普通物质)或者 37℃(哺乳动物)中预热 30min 以上。
空白管：取 1mL 石英比色皿，加入 850µL 试剂一，100µL 试剂二，50µL 试剂三，充分混匀，于 340nm 处测定 10 s 和 190 s 吸光度，记为 A 空 1 和 A 空 2，△A 空白管= A 空 1﹣A 空 2。
测定管：取 1mL 石英比色皿，加入 750µL 试剂一，100µL 试剂二， 100µL 上清液，50µL 试剂三，充分混匀，于 340nm 处测定 10 s 和 190 s 吸光度，记为 A 测 1 和 A 测 2，△A 测定管= A 测 1﹣A 测 2。

注意：空白管只需要测定一次。

三、GR 活性计算：

按蛋白浓度计算

活性单位定义：在一定温度中， pH8.0 条件下，每毫克蛋白每分钟催化 1µmol NADPH 氧化。
GR 酶活(U/mg prot)= [ (△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106] ÷(Cpr×V 样)÷T
=0.536×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr

按样本质量计算

活性单位定义：在一定温度中， pH8.0 条件下，每克样本每分钟催化 1µmol NADPH 氧化。
GR 酶活(U/g)= [ (△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106] ÷(W×V 样÷V 样总)÷T
=0.536×(△A 测定管-△A 空白管)÷W

按细胞数量计算

活性单位定义：在一定温度中，pH8.0 条件下，每 104 个细胞每分钟催化 1µmol NADPH 氧化。
GR 酶活(U/104 cell)= [ (△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106] ÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T=0.536×(△A 测定管-△A 空白管)÷细胞数量
ε：NADPH 摩尔消光系数 6.22×103L/mol/cm；V 反总：反应体系总体，1000µL=0.001 L；106： 1 mol=1×106µmol；Cpr：上清液蛋白浓度（ mg/mL）；V 样：加入反应体系中上清液体积，100µL =0.1 mL；V 样总：加入提取液体积ˈ 1mL；W，样本质量，g；T：反应时间，3 min。

注意事项：

样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，匀浆液避免反复冻融；
试剂二须现配现用，配置完后，置于冰上；
测定前须先用 1～2 个样做预实验，确保 180s 内吸光值变化呈线性，哺乳动物组织一般须用试剂一稀释 2～5 倍；
细胞中 GR 活性测定时，细胞数目须在 300 万-500 万之间，细胞中 GR 的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞。

注意：

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

备注:
以上数据均来自公开文献,博奥拓达暂未进行独立验证,仅供参考。
These protocols are for reference only. Biotopped does not independently validate these methods.

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操作步骤：

注意：空白管只需要测定一次。

三、GR 活性计算：

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